Wat is western blotting?

Wat is western blotting?
Anonim

Antwoord:

Het is het gebruik van antilichamen om eiwitten te detecteren die zijn gescheiden door SDS-PAGE en vervolgens zijn overgebracht naar een membraan.

Uitleg:

Cellen bevatten een mengsel van eiwitten (vele duizenden) en deze kunnen worden gescheiden door SDS-PAGE.

De eiwitten van de SDS-PAGE worden vervolgens overgebracht, door het gebruik van een elektrisch veld, van de gel naar een membraan dat typisch is gemaakt van nitrocellulose of polyvinylideenfluoride (PVDF).

Het membraan wordt onderzocht met een primair antilichaam dat specifiek is voor het eiwit van belang. Een secundair antilichaam wordt vervolgens gebruikt om het primaire antilichaam te detecteren. Het secundaire antilichaam bevat een marker die kan worden gedetecteerd door een chemische reactie om een zichtbare band op het membraan te geven of een signaal dat kan worden vastgelegd door een gespecialiseerde camera.

Indien nodig kan ik uitgebreid ingaan op dit antwoord, omdat ik tijdens mijn loopbaan enkele honderden Western-blots heb uitgevoerd.