Waarom worden DNase en lysozyme in lysisstappen gebruikt tijdens eiwitzuivering?

Waarom worden DNase en lysozyme in lysisstappen gebruikt tijdens eiwitzuivering?
Anonim

Antwoord:

Om de proteïnefractie te zuiveren …

Uitleg:

Als je een (vaak specifiek) eiwit zuivert, moet je zoveel mogelijk afval verwijderen dat mogelijk aan hen is gebonden.

Het hangt in zekere mate af van welk eiwit je zoekt, maar over het algemeen is het een goed idee, vooral in voorbereidend zuivering, om zoveel mogelijk onzuiverheden kwijt te raken.

1:

Omdat proteïnen over het algemeen groot zijn en bijgevolg in de lagere banden van uw (ultracentrifugeerde) fractie voorkomen, wilt u zich ontdoen van eventuele nucleidzuren, vooral als het eiwit dat u zuivert, betrekking heeft op Pol1, Reverse transcriptase of een ander enzym dat betrokken is bij replicatie / transcriptie / vertaling.

Je kunt de Nucleïnezuren die in het monster aanwezig zijn, scheiden door een DNAse te gebruiken: dit zal DNA volledig hydrolyseren in zijn samenstellende delen.

Let op, er zijn verschillende DNAse's, allemaal verschillend in hun mechanisme en specificiteit voor hun substraat. Afhankelijk van het DNAse dat wordt gebruikt, kan het ook worden weergegeven Endo- of exo- nuclease-activiteit …

Beter gezegd, RNAse is meer geschikt, omdat RNA zich meestal meer in het drijf- / fractiebereik van eiwitten bevindt en aan het eiwit kan worden gebonden.

2:

lysozym: Een enzym dat ten minste twee functies heeft:

Het deglycosyleert enzymen: de meeste eiwitten in de bloedbaan zijn geglycosyleerd: ze hebben een paar suikermoleculen eraan gehecht. Lysozyme zal de suikerresten verwijderen.

Het heeft ook de capaciteit om de celwand van Gram-positieve bacteriën af te breken, waardoor ze dat doen lyse. (als je eiwitten van grampositieve bacteriën wilt zuiveren)

Alle afgebroken producten, ofwel nucleïnezuur of suikerdeeltjes, zullen verschijnen aan de bovenste delen van de centrifugebuis vanwege hun "lichtere" drijfvermogen ….