Waarom gebruiken we een negatieve controle in PCR?

Waarom gebruiken we een negatieve controle in PCR?
Anonim

Antwoord:

Zie hieronder

Uitleg:

PCR werkt weg van een template-DNA. Laten we zeggen dat je op HIV test (HIV is een RNA-virus, maar wanneer het in een cel terechtkomt, wordt het omgezet in DNA … dus er zal HIV-DNA zijn in een geïnfecteerde cel). De primers die u gebruikt, maken een product (amplicon) dat overeenkomt met een deel van het HIV-DNA. Als u dit amplicon ziet, hebt u de HIV-sequentie aanwezig ….. maar als u geen negatieve controle heeft, kunt u besmet raken.

PCR is extreem gevoelig. Er zijn veel oplossingen gebruikt in PCR (water, buffer, dNTP's, enzym) … en ze kunnen allemaal gemakkelijk vervuild raken met DNA uit andere monsters, of zelfs van het amplicon dat is gemaakt in de reactie die je gisteren hebt gedaan. Dus als je het DNA-monster van de patiënt X hebt en je controleert op hiv door PCR, dan kunnen de PCR-primers een product van het hiv-DNA in het DNA-monster van patiënt X (als die persoon hiv heeft) maken, of het kan besmetting. Maar je kunt niet zeggen of het komt door besmetting of door HIV in het DNA van de patiënt.

Dus je voert een watercontrole uit. Tube 1 plaatst u alle componenten van de reactie en voor het DNA voegt u alleen water toe. Dit is de negatieve controle. NIETS moet hier versterken. In Tube 2 breng je alle reactiecomponenten en DNA van de patiënt X aan. Als je hier een product krijgt (en niets in buisje 1), heeft patiënt X waarschijnlijk het HIV-DNA in zijn / haar DNA. Als u een product krijgt in zowel Tube 1 als Tube 2, heeft u een contaminatieprobleem en kunt u niet zien of het HIV in het monster van de patiënt afkomstig is van de ziekte of van besmetting.

Dus je voert altijd een watercontrole uit (water in plaats van DNA).