Wat doen primaire antilichamen en secundaire antilichamen in de ELISA-test?

Wat doen primaire antilichamen en secundaire antilichamen in de ELISA-test?
Anonim

Antwoord:

Dat hangt af van het type ELISA-test.

Uitleg:

ELISA = Enzym Linked Immunosorbent Assay.

Er zijn verschillende soorten ELISA-testen. Wat je nodig hebt is:

  • antilichaam waaraan een enzym is gehecht
  • antigeen waaraan het antilichaam bindt
  • substraat van het enzym dat een meetbare reactie veroorzaakt

De enzym gehecht aan het antilichaam is vaak HRP (mierikswortelperoxidase). HRP kan reageren met verschillende substraten die ofwel van kleur veranderen of licht afgeven, beide meetbaar.

De afbeelding toont een overzicht van de verschillende soorten van ELISA-testen. Ik zal uitleggen hoe ze hieronder werken.

Directe ELISA

Een plaat is bekleed met het antigeen (Ag) en a primair antilichaam met enzym is toegevoegd. Wanneer het substraat wordt toegevoegd, zal de reactie optreden en is deze evenredig aan de hoeveelheid antilichaam-antigeen interacties.

Indirecte ELISA

Nogmaals, een plaat is bedekt met het antigeen en een primair antilichaam bindt aan het antigeen. EEN secundair antilichaam toegevoegd dat bindt aan het eerste antilichaam. Het tweede antilichaam bevat het enzym dat reageert met het substraat.

Sandwich-ELISA

Hier zijn twee of drie antilichamen bij betrokken. Een capture-antilichaam is aan de platen gehecht en bindt aan het antigeen. Dit wordt gevolgd door dezelfde stappen als de directe (slechts één antilichaam) of indirecte methode (twee antilichamen).

Concurrerende ELISA

Soms wordt dit een remmende ELISA genoemd, maar het is iets gecompliceerder. Een plaat wordt gecoat met het te onderzoeken antigeen. EEN primair antilichaam met enzym wordt eerst geïncubeerd met een monster met een onbekende concentratie van hetzelfde antigeen. Dit wordt vervolgens toegevoegd aan de plaat, waardoor de antilichamen die nog steeds vrij zijn om te reageren met het antigeen op de plaat. Nadat de antilichaam-antigeencomplexen van het monster zijn afgewassen, wordt het substraat toegevoegd.

Wanneer het onbekende monster veel antigeen bevat, zal er minder antilichaam vrij zijn om aan het plaatje = lager signaal te binden.