Wat is chromatografie-ionenwisseling? + Voorbeeld

Wat is chromatografie-ionenwisseling? + Voorbeeld
Anonim

Antwoord:

Het is een proces voor het scheiden van verschillende eiwitten op basis van hun lading en bindingseigenschappen aan een materiaal.

Uitleg:

Bij verschillende pH's hebben verschillende eiwitten verschillende ladingen. Door een mengsel van eiwitten op een ingestelde pH te plaatsen, kunt u een mengsel hebben dat eiwitten met verschillende ladingseigenschappen bevat.

Als dit mengsel van eiwitten op een kolom wordt gegoten die een materiaal bevat met een lading erop, zal de kolom eiwitten binden in tegenovergestelde lading.

U kunt dan verschillende oplossingen gebruiken die verschillende hoeveelheden ionen bevatten om de eiwitten uit de kolom te elueren (ontsluiten).

Stel dat u een mengsel van eiwitten hebt waarvan u een bepaald eiwit wilt zuiveren. Als je wist dat je proteïne van belang bij een bepaalde pH positief was geladen, kon je het mengsel op een kolom gieten die negatief geladen materiaal bevatte.

Alle eiwitten die geen lading hadden of die negatief geladen waren, vloeiden recht door de kolom. Je zou dan je positief geladen eiwit kunnen vrijmaken door de kolom te laten overstromen met positieve ionen die de negatieve lading op de kolom zouden voltooien. Deze competitie zou er vervolgens voor zorgen dat je eiwit van interesse wordt geëlueerd.

Hier is een voorbeeld van dit gebeurt.

Elke schaal bevat een buffer in een andere concentratie en zoals te zien is in het 175 mM monster (linkerbovenhoek) is er zeer weinig rood / bruin eiwit gebonden aan het geladen membraan omdat er competitie is tussen de ionen in de buffer en de eiwit voor de geladen bindingsplaatsen op het membraan (de ionen in de buffer hebben "gewonnen" omdat er meer van zijn en dus hebben ze voorkomen dat het eiwit bindt). In het voorbeeld rechtsonder heeft veel eiwit aan het membraan gebonden omdat er minder ionen aanwezig zijn om te strijden om bindingsplaatsen.

In deze video ziet u anionenwisselingschromatografie in bedrijf: